单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于免疫抗体种群特情人、寡核苷酸突显成本价高出平常许多的或操作使用标准流程很复杂。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯教导团队协作在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低利润、跨外来物种、全app平台兼容的全新解决方案。

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Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由华人国大地理学性院隔代隐性基因病与生长发育生态学学学习所和华人国大隔代隐性基因病直到学员学会牵头的时代国际科研讨论论文杂志杂志，秉承于消息灵魂地理学性和临床医学隔代隐性基因病学这个科技领域行业的原创设计性学习结果。JGG 202多年度的影响因素7.1，Scopus科研讨论论文杂志杂志评定指标值CiteScore 9.9，位居JCR 202多年度GENETICS & HEREDITY这个科技领域行业Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY这个科技领域行业Q1区，位居华人国大地理学性院论文杂志杂志系统盘生态学学种类别1区(Top论文杂志杂志)，隔代隐性基因病学和动物化学与碳原子生态学学小类双1区。

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有什么才是HEATag

精妙的“二合二为一”方案

HEATag是由凝集素和HUH内切酶定义的融成血清

「定位系统器」功能 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化表达（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「联系器」包块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）指数条型码来进行共价联系。

“1+1>2”的功效：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样表标上与朔源。

Fig1: HEATag重量标识原因举手图

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初级教程质量检验

HEATag说到底有大多能打？

可不可以在各种不同的条件下，做到蒲乳期植物组织系单组织混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。的研究团队合作为 HEATag 快速设置了多轮 “负压测试仪”，从神经元膜系到神经元膜核，从常温的到超低温，从新鲜范例到固定好范例，全方向位置效验它的耐用性和耐用性。

第二轮测试方法采取母乳喂养宠物神经元系：探析成员选了来自五湖四海人、鼠、仓鼠这三个植鱼类群的哪几种神经元（HEK293T、K562、MEF、CHO），在室内温度下能 HEATag 标签后融合测序。后面回收处理的 11447 个神经元中，85.66% 都能使用 HEATag 长形码准确性切换到原植鱼类群，样品间相交的污染很少，UMAP 聚类研究研究往往是之间证明材料，HEATag 长形码与植鱼类群特异形什么是基因组功能位置一直。 完了，试验状态进一个步骤持续：测试工作员成功在 4℃下标注新的人体細胞、在空调温度下标注甲醇放置人体細胞，还会立即标注人体細胞核。結果依旧会真视：拥有状态下，范例标签设计与动物群信心均还具有很棒的有关性，分拆精确率超 95%。然而甲醇放置会使得轻度的转录本交叉式环境污染，人体細胞核配制就会少量出 RNA 外流，人体細胞内型的注音結果依旧会与新的范例保持着与众不同，介绍信 HEATag 能否标注与众不同工作状态下的测试范例。

Fig2: HEATag 可在不一经济条件下达成单组织转录组混样具体分析

要能标识辅乳各种绿色和大海无脊柱各种绿色的原代体细胞

倘若说内部系考试是 “核心题”，那组织安排范例也就是 “追加题”， 等范例并非因内部多种类型更复杂、大环境适应能力性特出，成为了标记符号系统的 “困惑”，而 HEATag 恰巧在等 “困惑” 上塑造了强势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组织结构，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不只能被合理区分处理，所有核心神经细胞的类型的聚类算法结局都清析可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋生态学生态学的适用性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 方形码与动物群转录组极具较高相唯一性，没能出来因高盐生态环境诱发的 “标志发挥不了作用”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可体现母乳喂奶两栖动物组织性模板众多 scRNA-seq 定量分析

Fig4: HEATag可实现目标剥好深海无脊柱绿色众多 scRNA-seq 具体分析

HEATag与受损细胞的运用就不会吸引转录组的特殊变化

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在达成标记符号目标的一并，就不会对之后的的转录混合物析带来侵扰，确认了研究方案数据分析的逼真性。

Fig5: HEATag会损害样表的 RNA 表达出状态

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今后可期

HEATag 能为单神经细胞探索面临哪个？

HEATag 的交换价值，远不只是于 “解决处理标识问题”，它的灵活机动性和普遍意义，正当为单癌细胞分析拆开大量或许性

从用途场所来讲

HEATag 能重叠从 “简洁明了特别进行分析”（如癌团体结构性与没问题团体结构性、食用的药物加工处理与對照）到 “大建设范围科学研究分析”（如团体结构性上皮组织细胞图谱画出、mtk量筛分）的全範圍具体需求。跟随着 PIP-seq、Stereo-cell 等新颖可拓展技術的快速发展，HEATag 还能进第一步加强单上皮组织细胞科学研究分析的通量，机械助力科研管理团队合作组织开展更好 建设范围的新项目。

从跨范畴优势而言

HEATag 不光实应用在转录组学，还能与表观DNA组学、蛋白酶质组学、办公空间组学等水平切合，利用定制网站字段和寡核苷酸字段，HEATag 就也可以容易容入有所差异的组学的流程，不干扰网络信号捉捕的深度。直接，鉴于HEATag还就也可以成长 单神经元糖组学研究探讨水平。

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的合作动向

拜谱生物学与陈凯客座教授确立第一次合作协议有意向

什么值得点赞的是，在 HEATag 水平水平彰显出极大的应该用发展空间的背景图片下，拜谱菌物已与南方城市海底资源科学实践与建设项目江苏实践室（珠海）陈凯硕士生导师制定目标分式的运算相互合作协议但这并。彼此记划围绕着 HEATag 水平水平的品牌化实施、科学探讨转换等方面开始强度分工协作，促进推动相应低代价、跨种类的单細胞记号水平水平更加快应该用于具体情况科学探讨情况，为很多实践室保证科学规范、经济社会的单細胞探讨平台，助推器科学探讨办公者在細胞菌物学、海底资源菌物学、病新机制等行业拥有很多推动